終極酵母雙雜交技術

ULTImate Y2H

應用

ULTImate Y2H™是酵母雙雜交(Y2H)篩選技術的優化版,可檢測蛋白質-蛋白質的相互作用。
➢為您感興趣的蛋白質尋找新型互作蛋白。
➢將功能歸因於未表徵的蛋白質。
➢解開途徑和分子機器。

原理

利用轉錄因子的重組技術,將其分為轉錄因子的 DNA 結合域和激活域,分別與目標蛋白(BAIT)和蛋白文庫(PREY)做結合,並在兩酵母細胞中分別表達報告基因。


實驗進行的過程中,假使目標蛋白(BAIT)與蛋白文庫(PREY)兩者具有交互作用,轉錄因子的 DNA 結合域(DBD)與其激活域(AD)緊密相鄰。


功能性轉錄因子成功的重組後,激活下游 HIS3 報告基因的轉錄,因此使酵母細胞能夠在缺乏組氨酸的選擇性培養基上生長。我們即可針對陽性克隆的 DNA 進行測序和分析,鑑定出具有交互作用特性之蛋白。

主要特色

細胞間交配過程

Hybrigenics的專利技術允許每個篩選平均測試 8300 萬次互動,這與傳統的 Y2H 順序轉換方式不同,傳統的 Y2H 只能測試幾百萬次互動。

高度複雜的文庫篩選到飽和狀態

受益於在酵母菌中1000 萬個獨立克隆的隨機引物 cDNA 文庫,來從130 多個 cDNA 和基因組文庫 ( 超過45個類別 ) 中選擇,或要求自定義文庫。

​置信度評分

為每種相互作用分配一個統計的置信度得分,即 Predicted Biological Score (PBS®). 根據技術參數對相互作用蛋白進行排名。參數包括獨立獵物片段的數量以及我公司已有的對同一生物進行的所有篩選中得出的信息。
利用 e 值來計算 PBS®值,並且閾值用於定義從高置信度(A​​)到低置信度(D)相互作用的類別, 而 E 和 F 作為標記高度連接的獵物域和技術誤報的不同類別。

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選定交互域(SID®) 的鑑定

利用我們構建的結構域文庫,可以描述能
夠與您的目標分子相互作用的最小蛋白質
結構域。

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